Gene Link
提供的材料

儲存條件：

接收后儲存糖原和線性丙烯酰胺溶液at -20^oC 以及室溫下的所有其他溶液。

檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

DNA 和 RNA 沉淀溶液是所有分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本要求。Gene Link 使用無核酸酶水制備了一系列常見和流行的溶液，均為分子生物學(xué)級，也適用于 RNA 沉淀。

使用無核酸酶水制備糖原和線性丙烯酰胺溶液，并通過在 RNA 和 DNA 沉淀中使用核酸酶，隨后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳來檢測是否存在核酸酶，以確定核酸的完整性和無分解。

在無核酸酶高壓滅菌水中制備 LiCl、醋酸鈉、醋酸鉀和氯化鈉的適當(dāng)摩爾濃度溶液，制備后再次高壓滅菌。在無核酸酶高壓滅菌水中制備適當(dāng)摩爾濃度的乙酸銨溶液。檢測所有溶液的 DNA、RNA 和寡核苷酸沉淀。

經(jīng)認(rèn)證，所有溶液均不含核酸酶和核酸，并經(jīng)驗(yàn)證可用于 DNA 和 RNA 沉淀。需要適當(dāng)?shù)臒o核酸酶處理、分配和儲存條件。

在每個(gè)產(chǎn)品的標(biāo)簽和隨附的裝箱單上注明制造批號。

產(chǎn)品描述和應(yīng)用

DNA 和 RNA 的沉淀

經(jīng)典的分子生物學(xué)程序是乙醇沉淀濃縮 DNA、RNA 和寡核苷酸。變更為使用異丙醇。本產(chǎn)品手冊僅限于與核酸的酒精沉淀相關(guān)的描述。另一種濃縮 DNA 和 RNA 的方法是使用硅膠珠或玻璃纖維過濾器，在離液鹽存在的情況下優(yōu)先結(jié)合 DNA 和 RNA。參見Omni-Clean™該方法詳細(xì)信息的產(chǎn)品線。Omni-Clean™是從極稀溶液中濃縮 DNA 和 RNA，從凝膠切片中提取 DNA 和 RNA 的有效方法。

使用酒精進(jìn)行 DNA 和 RNA 沉淀是基于在存在鹽的情況下鹽析的原理，使核酸優(yōu)先變得不溶，并通過離心收集沉淀物。該工藝還純化了 DNA 和 RNA，留下醇溶性鹽、有機(jī)溶劑和洗滌劑。

由于磷酸二酯鍵的磷酸基團(tuán)，DNA 和 RNA 的骨架帶負(fù)電荷，因此水合，易溶于中性水。加入陽離子鹽和乙醇或異丙醇可破壞水合物外殼，促進(jìn)帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)和帶正電荷的離子之間形成離子鍵，有效中和 DNA 或 RNA 分子，導(dǎo)致沉淀。

乙醇與異丙醇

乙醇和異丙醇均用于核酸的沉淀。乙醇用于 DNA 和

1. -RNA 和異丙醇為 0.6 至 1 體積的 DNA 和 RNA 溶液，體積為 3。對于異丙醇，乙醇的終濃度在 60%-80% 和 30%-50% 之間變化。

異丙醇具有所需體積較小的優(yōu)點(diǎn)，通常用于沉淀大量核酸溶液。通常，向 1 體積 DNA 溶液中加入 0.6 至 1 體積的異丙醇。較高的量對較小的 RNA 的片段有用。相比之下，2 體積乙醇是 DNA 的標(biāo)準(zhǔn)品，2.5 體積是 RNA 溶液的標(biāo)準(zhǔn)品。但是，與乙醇相比，異丙醇的缺點(diǎn)是共沉淀更多的鹽，揮發(fā)性更低，并且風(fēng)干緩慢，增加了酒精殘留到終樣品中的風(fēng)險(xiǎn)。

載體/共沉淀劑

通過標(biāo)準(zhǔn)乙醇沉淀法，在 100-200 ng/mL 濃度下，DNA 和 RNA 沉淀相當(dāng)有效，并且通常在該濃度下也可見沉淀。低于 100 ng/mL 時(shí)通常無法實(shí)現(xiàn)定量沉淀，此外，沉淀不可見，因此難以完成乙醇沉淀。

傳統(tǒng)上使用 tRNA 和糖原作為載體來幫助沉淀和顆粒的可見性。這兩種物質(zhì)均來自生物來源，因此含有痕量核酸，其使用需要廣泛去除核酸和核酸酶。線性聚丙烯酰胺 (LPA) 是一種合成的惰性載體，因此不含核酸和核酸酶。

糖原和線性丙烯酰胺 (LPA) 對大多數(shù)分子生物學(xué)應(yīng)用的抑制作用均極小，因此可以相當(dāng)有信心地使用。

鹽

乙醇沉淀中常用的鹽是醋酸鈉、乙酸銨、氯化鈉和氯化鋰。

3M 醋酸鈉 ph5.2-5.5 溶液是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室核酸沉淀的標(biāo)準(zhǔn)試劑。下面列出了常用鹽及一些屬性。

冷卻溫度和時(shí)間

經(jīng)典的冷卻溫度為-20 ℃10-15 min，當(dāng) DNA 濃度低于 100 ng 時(shí)，這可能是選，但通常沒有必要，因?yàn)楫?dāng) DNA 濃度不受限制時(shí)，沉淀發(fā)生非常迅速。

不同實(shí)驗(yàn)室的沉淀冷卻時(shí)間不同，從-70 ℃、-20 ℃、0 ℃ 或室溫，持續(xù) 5 min 至過夜。對于低 DNA 濃度，可能需要長達(dá) 20 min 的離心時(shí)間才能有效回收。

在較低溫度下，酒精的粘度大大增加，可能需要離心更長時(shí)間才能有效沉淀 DNA。在-70 ℃ 孵育可提高小濃度或少量 DNA 的沉淀效率，但這些溶液應(yīng)在離心前恢復(fù)至 0 ℃。

離心速度和時(shí)間

一般 12K rpm 離心 5-10 min 足以沉淀 DNA 和 RNA。較長的離心時(shí)間可有效回收低濃度核酸，但通常無需增加超過 20 min。

干燥

應(yīng)注意在復(fù)溶前干燥沉淀的 DNA 和 RNA 以*蒸發(fā)乙醇或異丙醇。核酸不應(yīng)過度干燥，應(yīng)避免或在觀察到的足以蒸發(fā)酒精的較短持續(xù)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行加熱加速真空。通常將管在工作臺上保持打開幾分鐘就足夠了。

RNA 的沉淀

RNA 沉淀通常與 DNA 相似，而應(yīng)特別考慮無 RNase 處理和所有方法的性能。

選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

復(fù)溶

參見Gene Link DNA&RNA 重構(gòu)液[目錄號：40-3000-00]手冊。

DNA&RNA 重構(gòu)液包裝內(nèi)容物

目錄號：40-5014-05 RNA 復(fù)溶溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4）；50 mL 目錄號：40-3000-05 DEPC 處理水；50 mL

目錄號：40-3001-05 無核酸酶水（不含 DEPC）；50 mL 目錄號：40-5011-05 TE 緩沖液 1X 溶液 pH 7.0；50 mL

載體/共沉淀劑

糖原

糖原溶液 10 mg/mL；目錄號：40-5112-01

使用單價(jià)鹽和乙醇或異丙醇進(jìn)行有效的 DNA 和 RNA 沉淀取決于其濃度。濃度低于 50 ng/mL 時(shí)，DNA 和特異性 RNA 沉淀通常無法定量，沉淀不清晰可見，導(dǎo)致回收率不可靠。

添加糖原或線性丙烯酰胺作為載體/共沉淀劑有助于定量回收，特別是沉淀的清晰可見性。糖原不會干擾分光光度法讀數(shù)、電泳和包括 PCR 在內(nèi)的大多數(shù)分子生物學(xué)酶應(yīng)用。

用途：1µL (10µg) 10 mg/mL 糖原溶液足以用于 500µL DNA 或 RNA 溶液。糖原來源：糖原是一種來源于牡蠣的高純度多糖。

規(guī)格：分子生物學(xué)級。提供的糖原溶液經(jīng)驗(yàn)證不含 DNase 和 RNase。糖原溶液可能含有殘余核酸。

線性丙烯酰胺

線性丙烯酰胺溶液（線性聚丙烯酰胺，LPA；5 mg/mL）；目錄號：40-5113-01

使用單價(jià)鹽和乙醇或異丙醇進(jìn)行有效的 DNA 和 RNA 沉淀取決于其濃度。濃度低于 50 ng/mL 時(shí)，DNA 和特異性 RNA 沉淀通常無法定量，沉淀不清晰可見，導(dǎo)致回收率不可靠。

添加線性丙烯酰胺作為載體/共沉淀劑有助于定量回收，尤其是顆粒的清晰可見性。線性丙烯酰胺不干擾分光光度法讀數(shù)、電泳和包括 PCR 在內(nèi)的大多數(shù)分子生物學(xué)酶應(yīng)用。線性丙烯酰胺是合成的，保證不含所有核酸、dna 酶、rna 酶和蛋白酶。線性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量為 9-13 MDa。

用途：1-2µL (5-10µg) 5 mg/mL 線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液足以用于 500µL DNA 或 RNA 溶液。線性聚丙烯酰胺顆粒未緊密粘附在微量離心管底部。去除上清液時(shí)，小心不要丟棄沉淀物。

線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液來源：在無核酸酶分子生物學(xué)級水中制備的合成物。

規(guī)格：分子生物學(xué)級。提供的線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液經(jīng)驗(yàn)證不含 DNase、RNase、蛋白酶和核酸。線性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量為 9-13 MDa。

醋酸鈉

3M 醋酸鈉 pH 5.5 DNA&RNA 沉淀溶液；目錄號：40-5132-05

醋酸鈉可沉淀蛋白質(zhì)，因此，如果溶液含有大量蛋白質(zhì)，應(yīng)避免使用。

用途：0.3 M 醋酸鈉終濃度和 2-2.5 體積乙醇。

濃度≥20 ng/mL 時(shí) DNA 或 RNA 的常規(guī)沉淀

1. 添加 1/10^th3 MpH 值醋酸鈉的體積 5.5.
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 10 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風(fēng)干顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團(tuán)塊。
9. 選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

醋酸鉀

3M 醋酸鉀 pH 5.5 DNA&RNA 沉淀溶液；目錄號：40-5133-50

1. 醋酸鉀在 RNA 沉淀中特別有用，用于無細(xì)胞翻譯，因?yàn)樗苊饬蒜c離子的加入。
2. 沉淀蛋白質(zhì)，因此如果溶液含有大量蛋白質(zhì)，應(yīng)避免沉淀。
3. 避免與含 SDS 的 DNA 和 RNA 溶液一起使用。SDS 的鉀鹽極不溶。

用途：0.3 M 醋酸鉀終濃度和 2-2.5 體積乙醇。

濃度≥20 ng/mL 時(shí) DNA 或 RNA 的常規(guī)沉淀

1. 添加 1/10^th3 M 醋酸鉀 pH 值的體積 5.5.
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 10 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風(fēng)干顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團(tuán)塊。
9. 選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

氯化鈉

5M 氯化鈉 DNA&RNA 沉淀；目錄號：40-5134-05

1. 無需調(diào)節(jié) pH 值。
2. 高洗滌劑含量溶液中的選鹽。SDS 可溶于 70% 乙醇，確保無洗滌劑 DNA 沉淀。

用途：0.3 M 氯化鈉終濃度和 2-2.5 體積乙醇濃度≥500 ng/mL 時(shí) DNA 或 RNA 的常規(guī)沉淀

1. 加入 5M 氯化鈉至終濃度 0.3M。
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風(fēng)干顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸沉淀
9. 選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

乙酸銨：7.5M 醋酸銨 DNA&RNA 沉淀液；目錄號：40-5135-05

1. 揮發(fā)性溶液，請勿高壓滅菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的選鹽，因?yàn)檫@些物質(zhì)仍保留在溶液中。
3. 如果作為銨離子的激酶化抑制多核苷酸激酶，則避免使用。
4. 2.5M 乙酸銨與乙醇沉淀 DNA，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸銨終濃度和 2.5 體積乙醇用于 RNA 濃度≥20 ng/mL 時(shí) DNA 或 RNA 的常規(guī)沉淀

1. 加入 0.5 體積的 7.5 M 乙酸銨。渦旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min
3. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
8. 風(fēng)干顆粒 5 min。
9. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團(tuán)塊。
10. 選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

乙酸銨：5M 醋酸銨 DNA&RNA 沉淀液；目錄號：40-5136-05

1. 揮發(fā)性溶液，請勿高壓滅菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的選鹽，因?yàn)檫@些物質(zhì)仍保留在溶液中。
3. 如果作為銨離子的激酶化抑制多核苷酸激酶，則避免使用。
4. 2.5M 乙酸銨與乙醇沉淀 DNA，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸銨終濃度和 2.5 體積乙醇（用于 RNA）

濃度≥20 ng/mL 時(shí) DNA 或 RNA 的常規(guī)沉淀

1. 加入 1 體積 5 M 乙酸銨。渦旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min
3. 加入 2 體積 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
8. 風(fēng)干顆粒 5 min。
9. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸沉淀
10. 選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

LiCl RNA 沉淀溶液：(7.5M LiCl，50 mM EDTA pH 8.0)；目錄號：40-5131-05

不得用于小于 300 個(gè)核苷酸的 RNA 的沉淀。

終濃度為 2.5M 的 LiCl 在不添加乙醇的情況下可有效沉淀大于 300 個(gè)核苷酸的 RNA，這種沉淀方法選擇性沉淀 RNA，不能有效沉淀 DNA、蛋白質(zhì)或碳水化合物 (Barlow et al.,1963)。它是去除 RNA 制劑中翻譯或 cDNA 合成抑制劑的選方法 (Cathala et al.,1983)。同時(shí)為從體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中回收 RNA 提供了一種簡單快速的方法。4 ℃、12K rpm 離心 20 min，可定量回收低至 50 ng 的 RNA。

用途：在不添加乙醇或異丙醇的情況下，對 2.5 M 氯化鋰進(jìn)行終濃縮。濃度≥100 ng/mL 時(shí) RNA 的常規(guī)沉淀。

1. 加入 0.5 體積的 7.5 MLiCl。（請勿添加乙醇）
2. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
3. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
4. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 風(fēng)干顆粒 5 min。
7. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 或 1 mM 檸檬酸鈉 pH 6.4 中重懸團(tuán)塊。
8. 選 RNA 復(fù)溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

參考文獻(xiàn)

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7. Cathala,G 等人“完整、翻譯活性核糖核酸的分離方法。”DNA2 (1983): 329-335.

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