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AssayQuant：以熒光團技術，賦能高通量篩選與機制研究

更新時間：2025-04-16

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AssayQuant Technologies專注于開發激酶和磷酸酶的熒光檢測技術，致力于為生物醫藥研發提供高效、精準的解決方案。公司以PhosphoSens技術為核心，通過實時監測酶活性反應曲線，突破傳統終點法的局限性，幫助科研人員更深入地理解抑制劑作用機制。

AssayQuant的產品線覆蓋400余種激酶和磷酸酶檢測試劑盒，以及超30,000種熒光多肽底物，支持從基礎研究到藥物開發的全流程應用。其技術已在全球范圍內被132篇文獻引用，并與多家國際藥企及研究機構建立合作。

作為中國市場的戰略布局，AssayQuant自2022年起授權上海起發實驗試劑有限公司為全國一級代理商，提供本地化技術支持與服務。

核心優勢

1.PhosphoSens技術

SOX熒光團：尺寸小（與色氨酸相當）、疏水性低，可直接標記底物多肽，實現連續熒光信號輸出，避免化合物自身熒光干擾。

動態監測：每30秒至2分鐘采集數據，實時捕捉酶活性變化，支持動力學參數（如IC50、Ki、kon/koff）計算。

2.高特異性與生理相關性

底物基于天然激酶底物序列優化，確保實驗結果與體內環境高度一致，生化實驗與體內研究相關性優異。

3.多功能檢測模式

連續熒光檢測：兼容常規熒光酶標儀，無需額外設備。

時間分辨熒光（TRF）：使用Eu3?替代Mg2?，通過紅移信號（620nm）消除背景干擾，適用于高靈敏度終點檢測。

4.靈活應用場景

支持抑制劑效能評估、激酶組分析、高通量篩選（HTS）、脫靶效應研究等，覆蓋腫瘤、免疫、代謝疾病等領域。

主要產品、技術介紹：

1.ALK [C1156Y]（PhosphoSens Substrate: AQT0101）

AssayQuant 的 PhosphoSens 連續檢測技術采用簡單的 “添加-讀取"操作流程，支持實時動力學監測，僅需通過熒光強度（FI）測量即可完成。

該技術通過測量反應初始階段（通常為前30-60分鐘）的初始線性區域斜率，提供高精度和高準確性的初始反應速率數據，并以每30秒至2分鐘的頻率采集大量數據點。

連續檢測格式還可通過以下方式校正化合物自熒光干擾：

背景信號（包含化合物及反應體系中除酶外的所有組分）的熒光信號在反應過程中恒定不變；

通過從總熒光信號（包含酶及所有反應組分）中減去背景信號，即可計算每個時間點的凈信號。

該技術兼容幾乎所有具備動力學讀板功能的商用熒光酶標儀及實驗室自動化設備，無需終止反應或顯色步驟，顯著縮短實驗時間并提升通量。

2.ABL1(PhosphoSens Substrate: AQT0030)

由于許多化合物庫含有自熒光化合物，AssayQuant 推出了 PhosphoSens Red 檢測試劑盒，該試劑盒允許在更長波長（>600 nm）下進行檢測，同時保持相同的激發波長最大值，并采用時間分辨熒光（TRF）技術。

我們建議在激發光與發射波長檢測之間設置 100 微秒延遲，并采用 300 微秒采集時間，以避免反應混合物中熒光材料（具有納秒級短壽命）的信號干擾。

反應完成后，向每個孔中加入基于銪離子（Eu3+）的試劑，該試劑會置換螯合復合物中的 Mg2+。Soc 熒光團被激發后，通過敏化作用增強銪的發光，產生最大波長為 615 nm（紅色）的光信號，可通過標準濾光片進行測量。

3.CDC42BPG（PhosphoSens Substrate: AQT0837）

由于許多化合物庫含有自熒光化合物，AssayQuant開發了PhosphoSens Red檢測技術，該技術允許在更長波長（>600 nm）下進行檢測，同時保持相同的激發波長最大值，并采用時間分辨熒光（TRF）技術。

我們建議在激發光與發射波長檢測之間設置100微秒延遲，并采用300微秒采集時間，以避免反應混合物中熒光材料（具有納秒級短壽命）的信號污染。

反應完成后，向每個孔中加入基于銪離子（Eu3?）的試劑，該試劑會置換螯合復合物中的鎂離子（Mg2?）。Sox熒光團的激發會敏化銪離子的發光，產生最大波長為615 nm（紅色）的光信號，可通過標準濾光片進行測量。

目標客戶群體

生物醫藥企業：小分子激酶抑制劑研發、臨床前藥效評價。

科研機構：癌癥、免疫疾病等領域的酶學機制研究。

CRO/CDMO：高通量篩選、化合物庫活性評估。

診斷試劑開發：基于激酶活性的檢測方法學建立。

常見問題與解答

Q1：PhosphoSens技術與傳統終點法相比有何優勢？

A：傳統終點法僅能獲取單一時間點數據，而PhosphoSens通過連續監測反應曲線，可精準計算動力學參數（如IC50、Ki），并區分可逆/不可逆抑制劑。

Q2：SOX熒光團是否兼容常規熒光酶標儀？

A：是的。SOX在485nm激發/485nm發射模式下，與主流酶標儀（如FlexStation 3、SpectraMax）兼容。

Q3：如何解決化合物自身熒光干擾問題？

A：使用PhosphoSens-Red試劑盒（含Eu3?），通過時間分辨熒光（延遲100秒讀取620nm信號）有效規避干擾。

Q4：是否支持高通量篩選（HTS）？

A：支持。PhosphoSens試劑盒設計適配96孔板，可集成至自動化液體處理系統，單板通量達384孔。

Q5：能否定制特殊突變體底物？

A：可以。AssayQuant提供定制化多肽合成服務，覆蓋野生型及常見突變體（如EGFR T790M、ALK C1156Y）。

Q6：樣品處理對檢測結果影響大嗎？

A：建議使用低濃度ATP（1-2 mM）模擬生理條件，并避免反復凍融。具體方案可參考產品說明書或聯系技術支持。

Q7：試劑盒的有效期和儲存條件？

A：多數試劑盒有效期為12個月，需避光儲存于-20℃。凍干粉需復溶后48小時內使用。

Q8：如何驗證抑制劑的可逆性？

A：采用“跳躍稀釋法"：在高濃度抑制劑（>IC50 25倍）中孵育酶后稀釋，可逆抑制劑活性恢復，不可逆抑制劑活性維持低位。

Q9：是否提供技術培訓與文獻支持？

A：是的。AssayQuant提供線上/線下操作培訓，并可分享同類靶點的成功案例及文獻數據。

Q10：支持哪些物種的激酶檢測？

A：目前主要覆蓋人類激酶組，部分試劑盒兼容小鼠、大鼠等模式生物，定制服務可擴展至其他物種。

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Sample	Ammonium bicarb solution for peptide solubilization	1.0 mL	AssayQuant

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