上海起發(fā)為complementtech一級(jí)經(jīng)銷商，Complement Technology，Inc.于2005年成立.CompTech于2005年收購Advanced Research Technologies。Complement Technology繼續(xù)為世界各地的科學(xué)家提供高質(zhì)量的試劑，并在我們的清單中增加了許多新試劑。我們盡力為您的應(yīng)用提供宜試劑和使用我們補(bǔ)充試劑的適建議。 

CompTech EA 說明書

名稱：   EA（抗體致敏綿羊紅細(xì)胞） 

     EA (antibody-sensitized sheep erythrocytes)                 

目錄號(hào)：   B200 和B201 和B202           

可用尺寸： 5 mL ， 10 mL和20 mL                

濃度：          5×10 ^8個(gè)細(xì)胞/ mL

吸光度：              甲_412nm處 = 0.87以1/50稀釋在去離子水中

形式：                         液體 - 不要凍結(jié)

活性：                     補(bǔ)體CH50檢測功能齊全

緩沖區(qū)：                       GVB ⁺⁺ （CompTech＃B100和B102）

防腐劑：             GVB ⁺⁺含有0.025％sodium azide作為殺菌劑

儲(chǔ)存：                     + 4 ^o C 避免冷凍。冷凍裂解細(xì)胞。    

資源：                       正常 來自美國農(nóng)業(yè)部注冊設(shè)施的羊血。

產(chǎn)地：                       制造于美國。

一般描述

            涂有兔抗羊紅細(xì)胞抗血清（溶血素）的綿羊紅細(xì)胞傳統(tǒng)上用于測定血清樣品中補(bǔ)體經(jīng)典途徑的活性。  這些測定產(chǎn)生血清的CH50滴度（Morgan，BP（2000）; Dodds，AW和Sim，RB（1997））。 

            在CH50測定（GVB ⁺⁺）中使用的傳統(tǒng)緩沖液中以測定準(zhǔn)備濃度提供EA 。  他們每周一早上準(zhǔn)備新鮮，需要在 周五之前訂購，以便在下周接收。  它們在周一下午由隔夜快遞運(yùn)送到周二（或大多數(shù)貨運(yùn)的周三）。它們通?？稍谥苽浜笫褂?周。他們被運(yùn)往冷，但并不在室溫下長時(shí)間傷害（請注意，循環(huán)60-90天，37 ^Ø ç 體內(nèi)）。它們應(yīng)該一次每次使用前（在500 3分鐘，4?1000×g下進(jìn)行洗滌^ö C）和再懸浮       在GVB ⁺⁺中的原始濃度 以減少背景。  該程序也可用于濃縮細(xì)胞。  這可以通過減少用于重懸細(xì)胞的體積來實(shí)現(xiàn)。

物理特征

            由于以下原因，EA由IgM抗體制成。  IgM在激活經(jīng)典途徑方面比IgG高約100倍，因?yàn)镃1q必須與抗體上的至少兩個(gè)Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合以進(jìn)行激活。  因此，在敏感的測定中，已經(jīng)估計(jì)每個(gè)EA少至10個(gè)IgM可以引起裂解，而IgG裂解每個(gè)EA需要大約1000個(gè)IgG（Ross，GD（1986））。  這主要是因?yàn)樵贗gM中，在每個(gè)分子上的固定位置上存在五個(gè)緊密間隔的Fc結(jié)構(gòu)域。  因?yàn)楸砻嫔螴gG分子的間隔更隨機(jī)，所以在細(xì)胞表面上的正確位置發(fā)現(xiàn)2至5個(gè)IgG分子以結(jié)合并激活C1的可能性較小。

測定

            盡管CH50滴度被廣泛使用并且作為補(bǔ)體活性的主要臨床試驗(yàn)，但CH50測定程序尚未*標(biāo)準(zhǔn)化。  在研究實(shí)驗(yàn)室中，有與實(shí)驗(yàn)室一樣多的程序，但所有程序基本相似并且給出有用的結(jié)果。  可根據(jù)要求從CompTech獲得詳細(xì)的逐步典型CH50滴定方法。  簡而言之，稀釋含有補(bǔ)體的血清樣品，使得測定中的終稀釋度為1/100至1/500。  對(duì)照包括兩個(gè)沒有0％裂解背景補(bǔ)體的試管和兩個(gè)試管，其中用水代替緩沖液進(jìn)行100％裂解對(duì)照。  在濕冰上應(yīng)設(shè)置分析管。  用GVB ⁺使體積達(dá)到1.3mL⁺ （或水），將管混合并加入0.2mL 5×10 ⁸EA / mL的細(xì)胞并混合。  的反應(yīng)，應(yīng)溫育在37 60分鐘 ^ö ℃水浴含有大約10周分鐘的間隔再混合。  1小時(shí)后，將剩余的細(xì)胞離心（500-1000×g，3分鐘），并在1cm比色皿中在541nm處測定上清液的吸光度。  有多種數(shù)學(xué)方法可用于繪制結(jié)果圖。通過在對(duì)數(shù) - 對(duì)數(shù)圖上繪制x軸上的每個(gè)測定中使用的微升血清和y軸上的y /（ 1-y），可以獲得幾乎的直線。  術(shù)語“y”是指裂解的細(xì)胞的比例，在0％裂解時(shí)為0，在30％裂解時(shí)為0.3，在50％裂解時(shí)為0.5，等等。  補(bǔ)體樣品的CH50值從該線在y軸上穿過1.0（50％裂解）獲得，并計(jì)算如下：CH50 = 1000除以血清的體積（以μL計(jì)），得到50％裂解。  例如，如果用5.6μL血清達(dá)到50％裂解，則CH 50 = 179單位/ mL。  應(yīng)該注意的是，可以在應(yīng)該是相同的樣品上獲得不同的CH 50值。  這是  CH50測定中涉及的大量變量的結(jié)果，包括在春季收獲的綿羊紅細(xì)胞比在秋季抽取的血液中的細(xì)胞更容易溶解，沒有兩個(gè)溶血素抗體很多是相同的，因?yàn)樗鼈兪怯赏米拥犬a(chǎn)生的抗血清制成的。

應(yīng)用

            EA可用于確定血清的CH50溶血滴度，即CH50（參見上文的測定）。  它們可用于使用耗盡的血清滴定單個(gè)補(bǔ)體成分的功能活性。  它們也可用于制備攜帶活化的補(bǔ)體中間體的細(xì)胞（Morgan，BP（2000）; Dodds，AW和Sim，RB（1997））。  將EA與C1溫育以制備（EAC1）或C1和C4（EAC14）。  可以將EAC14細(xì)胞與C2一起溫育以制備攜帶經(jīng)典途徑C3轉(zhuǎn)化酶的EAC142細(xì)胞，并且可以將EAC142與C3一起溫育以制備攜帶C5轉(zhuǎn)化酶的EAC1423細(xì)胞。  每種中間體可用于測定流體相組分的功能補(bǔ)體活性。  例如，EAC142細(xì)胞的裂解對(duì)低C3濃度極其敏感，并且即使在諸如血清的復(fù)雜混合物中，這也可用于滴定C3補(bǔ)體活性。

規(guī)    

            綿羊紅細(xì)胞（Es）用于人補(bǔ)體測定，部分是為了方便，但也因?yàn)樗鼈內(nèi)狈θ搜a(bǔ)體的膜結(jié)合調(diào)節(jié)劑。  對(duì)于人補(bǔ)體，在Es上不存在顯著水平的功能性DAF，CD59或CR1。  因此，Es對(duì)于它們?nèi)狈δふ{(diào)節(jié)活性是有用的。

參考

摩根，BP編輯。（2000）補(bǔ)充方法和協(xié)議。  Humana新聞。

Dodds，AW和Sim，RB編輯（1997年）。補(bǔ)充實(shí)用方法（ISBN 019963539）牛津 大學(xué) 按， 牛津。

Ross，GD（1986）補(bǔ)體系統(tǒng)的免疫生物學(xué)。（ISBN 0-12-5976402）奧蘭多學(xué)術(shù)出版社。

僅供研究使用。

不適合人類或藥物使用。

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