cytoskeleton AKL95-B說明書

發布時間：2018/8/17

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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產品。我們專注于生產純化蛋白質和易于使用的試劑盒，以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。

除了我們現有的產品，我們還在產品線中為微管，微管蛋白，運動蛋白，小G蛋白效應物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。

結合蛋白質

· 概述

· 關于

· CITATIONS

· 常見問題解答

測定所有肌動蛋白結合蛋白（ABP）以確保其活性與公布的值相當。測定因產品而異，包括F-肌動蛋白切斷測定，F-肌動蛋白激活的ATP水解和肌動蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結構域蛋白在肌動蛋白聚合中的作用（右）。

Cytoskeleton，Inc。銷售一系列純化的肌動蛋白結合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動蛋白結合蛋白都具有高純度，并經過嚴格的生物活性測試。細胞骨架還為肌動蛋白結合蛋白研究提供肌動蛋白，抗體和試劑盒。

由Arp2 / 3和WASP VCA結構域刺激的肌動蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3（Cat。＃RP01）和WASP VCA（Cat。＃VCG03）結構域對肌動蛋白聚合的影響。

肌動蛋白與細胞中的多種蛋白質相互作用
*，F-和G-肌動蛋白與細胞中的多種蛋白質相互作用（14）??。目前有超過150種已知的肌動蛋白結合蛋白（ABP），其占細胞蛋白的約25％。ABP在肌動蛋白細胞骨架上賦予大量功能多樣性，其涉及諸如肌肉收縮，唇形突破，細胞運動，胞質分裂和細胞質流動的過程。研究這些過程如何調節肌動蛋白絲功能和動力學是一個重要且不斷增長的研究領域。

可以通過使用生物化學，遺傳學和免疫學方法分離和研究肌動蛋白結合蛋白。因為存在超過50種類型的肌動蛋白結合蛋白，所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動蛋白親和柱通常用于親和純化ABP，無論它們是F-或G-肌動蛋白結合。可以通過利用芘肌動蛋白熒光的聚合增強來進行顯示潛在ABP影響肌動蛋白動力學的簡單測定（參見測量肌動蛋白聚合物部分）。這種性質的研究有助于鑒定新的肌動蛋白結合蛋白。有幾篇值得一讀的關于識別和量化新肌動蛋白結合蛋白的可能方法的評論（15,16,17）?

問題1：哪種肌動蛋白結合蛋白（ABP）可用作F-肌動蛋白結合對照？

答案1：肌動蛋白結合蛋白α-輔肌動蛋白（Cat。＃AT01）是一種F-肌動蛋白結合和交聯蛋白，使其可用作F-肌動蛋白結合研究的對照。它的Kd是1μM，這意味著在該濃度下發生50％結合。因此，我們的目標是使用 2μM的α-肌動蛋白作為結合測定中的陽性對照。在結合反應中，2μM濃度的α-輔肌動蛋白相當于0.23μg/μl。此外，α-輔肌動蛋白對pH敏感，其高親和力發生在pH 7.0。

問題2：Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動蛋白活力？

答案2：遺憾的是，我們不會出售運動級肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動蛋白運動試驗。我們發現質量控制測試非常難以復制，因此我們無法充分確保試劑的質量。因此，肌球蛋白（Cat。＃MY02和MY03）和重型meromyosin蛋白（Cat。＃MH01）不推薦用于F-肌動蛋白運動測定。已經測試過這些試劑的客戶在運動方面沒有取得很好的成功，因此我們不建議購買樣品進行測試。如果需要運動級肌動蛋白或重型meromyosin，我們建議遵循原始方案（Kron和Spudich，1985）并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩定性。

參考文獻： SJ Kron和JA Spudich，1985年。熒光肌動蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動。PNAS，83,6272-6276。

結合蛋白質系列產品：

PHDG1	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH1	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN1	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK001	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK003	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL95	Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD99	Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS99	Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL99	Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF99	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP05	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
PHDG2	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH2	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN2	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK005	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK007	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL96	Actin protein (>96% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD100	Actin protein (>100% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS100	Actin protein (>100% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL100	Actin protein (>100% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF100	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP06	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
PHDG3	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH3	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN3	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK009	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK011	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL97	Actin protein (>97% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD101	Actin protein (>101% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS101	Actin protein (>101% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton

肌動蛋白（純度> 95％）：兔骨骼肌

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

1x1毫克（Cat。＃AKL95-B）

5x1 mg（Cat。＃AKL95-C）

產品用途包括

· 肌肉肌動蛋白結合蛋白的鑒定和表征

· 體外肌動蛋白聚合研究

· Western印跡分析的抗體標準

從兔骨骼肌中純化出肌動蛋白材料。 AKL99肌動蛋白純度大于99％，AKL95純度大于95％。肌肉肌動蛋白的分子量約為43kDa。兔肌肉肌動蛋白作為白色凍干粉末提供。凍干的蛋白質在4℃下干燥至<10％濕度時保存6個月。當再在蒸餾水中構成為10毫克/毫升，該蛋白質是在以下緩沖液：5mM的的Tris-HCl pH 8.0中，0.2毫米氯化鈣₂，0.2mM的ATP，5％蔗糖和1％的葡聚糖。

純度
通過在12％聚丙烯酰胺凝膠上掃描Coomassie Blue染色蛋白的光密度測定法測定純度。AKL99由> 99％純肌肉肌動蛋白組成，而AKL95純度> 95％（見圖1）。


	圖1：圖1.兔骨骼肌肌動蛋白的純度。在SDS-PAGE凝膠上運行100μg> 99％純（AKL99）和> 95％純（AKL95）兔骨骼肌肌動蛋白，并用考馬斯藍染色。箭頭表示肌動蛋白，箭頭表示α-肌動蛋白污染物（115kDa）。純化的肌動蛋白中的微量雜質主要是肌動蛋白結合蛋白，例如α-肌動蛋白和凝溶膠蛋白。

生物活性
肌肉肌動蛋白的生物活性由其在體外有效聚合成長絲（F-肌動蛋白）的能力和在旋轉分析中與未聚合組分分離的能力決定。嚴格的質量控制確保AKL99產生> 90％的F-肌動蛋白，AKL95在該測定中產生> 80％的F-肌動蛋白。

問題1：儲存肌動蛋白的*方法是什么，以確保大的穩定性和保質期？

答案1： 細胞骨架提供我們所有的肌動蛋白作為凍干粉末，以便它們可以在室溫下運輸。收到后，凍干粉末應在4℃下儲存在帶有干燥劑的密封容器中。重要的是監測干燥劑的新鮮度并確保其繼續吸收水分以保護凍干的肌動蛋白。妥善儲存后，凍干肌動蛋白保證自購買之日起6個月內保持穩定。或者，肌動蛋白可立即以推薦的濃度重新懸浮，等分，在液氮中快速冷凍并儲存在-70℃。冷凍的等分試樣可穩定6個月。解凍冷凍等分試樣時，重要的是在室溫水浴中解凍。

問題2：聚合后儲存F-肌動蛋白的*方法是什么？

答案2： G-肌動蛋白在4°C下穩定2天，需要二價陽離子，pH 6.5 - 8.0和ATP穩定性。F-肌動蛋白是穩定的，可以在4°C下儲存1-2周。F-肌動蛋白需要ATP（0.2mM）和Mg2 +（2mM）的穩定性，并且在pH6.5和pH8.5以下是不穩定的。F-肌動蛋白對冷凍不穩定。F-肌動蛋白可以轉移到各種緩沖液（例如HEPES，磷酸鹽等）而沒有不利影響。我們建議在4°C下儲存F-肌動蛋白時，添加抗菌劑，如100μg/ ml氨芐青霉素和10μg/ ml氯霉素。

Mohammad等，2012。Flightless I是一種粘附相關的肌動蛋白加帽蛋白，可調節細胞遷移。FASEB?。doi：10.1096 / fj.11-202051。

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貨號	品名	規格	品牌
BK165-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK165	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK163-S	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK163	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK160-S	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK160	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK162-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK162	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK161-S	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK161	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
AAC04-Beads	Acetyl-Lysine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
APY03-Beads	Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM11-Beads	SUMOylation 1 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM24-Beads	SUMOylation 2/3 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
UBA01-Beads	Ubiquitination Affinity Beads	ea	cytoskeleton
CIG02-Beads	Acetyl-Lysine Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG03-Beads	SUMO1 IP Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG01-Beads	IgG Control Beads	ea	cytoskeleton
CUB02-Beads	Ubiquitination Control Beads	ea	cytoskeleton
BLR01	BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit	ea	cytoskeleton
BLR02	BlastR™ Rapid Filtration Kit	ea	cytoskeleton
AAC02	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)	ea	cytoskeleton
AAC03	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC03-HRP	Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC01	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)	ea	cytoskeleton
APY03	Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
APY03-HRP	Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
ASM01	SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)	ea	cytoskeleton
ASM24	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)	ea	cytoskeleton
ASM23	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
ASM23-HRP	SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
AUB01	Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
AUB01-HRP	Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
PHDG1	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH1	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN1	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK001	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK003	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL95	Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD99	Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS99	Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL99	Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF99	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP05	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
APHR	Actin protein (rhodamine): human platelet	ea	cytoskeleton
AR05	Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AT01	Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
RP01P	Arp2/3 protein complex: porcine brain	ea	cytoskeleton
CS-TFC01	Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)	ea	cytoskeleton
CF01	Cofilin 1 protein: human recombinant	ea	cytoskeleton
HPG6	Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant	ea	cytoskeleton
MH01	Heavy meromyosin protein	ea	cytoskeleton
CS-MH03	Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)	ea	cytoskeleton
CS-MYS03	Myosin - cardiac S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS04	Myosin - skeletal muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS05	Myosin - smooth muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
MY02	Myosin II protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
MY03	Myosin protein: bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
PR02	Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant	ea	cytoskeleton
PHDR1	Rhodamine Phalloidin	ea	cytoskeleton
CY-SC001	SiR-Actin Kit	ea	cytoskeleton
CY-SC013	SiR700-Actin Kit	ea	cytoskeleton
VCG03	WASP protein VCA domain: GST tagged: human	ea	cytoskeleton

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7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發，歡迎合作。

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